ПРИЖИЗНЕННЫЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ БОЛЕЗНЕЙ РЫБ
Рыбоводы-селекционеры государственных рыбопитомников и любители-аквариумисты нередко располагают весьма редкими ценными рыбами. Известно, что одним из общепринятых методов диагностики болезней рыб является патологоанатомическое вскрытие рыбы с одновременной микроскопией отдельных органов и тканей. Исследуемая рыба при этом погибает. Если учесть, что многие болезни вызывают паразиты, локализующиеся на поверхности наружных органов и тканей, то становится очевидной необоснованность вскрытия, хотя и больной, но живой рыбы.
При работе мы часто применяем метод прижизненной диагностики болезней рыб. При этом делают нежный соскоб с поверхности кожного покрова тела и плавников рыбы, который помещают на предметное стекло, куда вносят 1 - 2 капли водопроводной или кипяченой воды. Содержимое соскоба растирают препаровальными иглами до однообразной массы, покрывают покровным стеклом, после чего препарат просматривают под разными увеличениями микроскопа.
К недостаткам этого метода относятся:
выявление ограниченного количества видов паразитов рыб, локализующихся только на коже и плавниках рыбы (костий, оодиниумов, триходин, хилодонелл, ихтиофтириусов, гиродак-тилусов; реже - дактилогирусов);
при более глубоких соскобах слизи, хотя и незначительно, но нарушается целостность кожного покрова тела и плавников рыбы. Иногда места соскоба утрачивают небольшое количество чешуек, регенерация которых по ряду причин может быть продолжительной. Все это способствует проникновению в организм рыбы заразного начала в виде вирусов, бактерий, споровиков и поселению на травмированных участках тела паразитических грибков;
остается неисследованным жаберный аппарат рыбы.
В. Г. Енгашев (1975) впервые предложил более полный и совершенный метод прижизненной диагностики болезней экзотических рыб. Принципиальное отличие этого метода от описанного выше заключается в том, что исследователь не делает соскоб скальпелем, а просматривает часть или всю поверхность тела и плавников рыбы под стереоскопическим микроскопом типа МБС. Для более тщательного исследования слизь с поверхности кожного покрова, плавников, жабр берут волосяной кисточкой, что исключает травмирование рыбы.
Сбор и анализ анамнестических данных, клиническое исследование, учет условий содержания и кормления рыбы, а также гидрохимического режима водоема и его санитарного состояния приобретают при этом особо важное значение.
Из аквариума отлавливают несколько экземпляров подозреваемых в заболевании рыб и доставляют их в лабораторию. Количество рыб зависит от полноты сведений, собранных исследователем.
При транспортировке и пересадке рыбы следует избегать пользоваться сачком, так как последний, особенно капроновый, приводит к механическому удалению с тела и плавников рыбы определенного количества слизи, в которой могут находиться эктопаразиты. С этой целью аккуратно переливают воду вместе с рыбой из одного сосуда в другой. Предварительно большую часть воды из сосуда, где находятся исследуемые рыбы, удаляют с помощью шланга. Кроме того, следует учитывать, что при резкой смене температуры, газового и солевого состава воды эктопаразиты временно покидают рыбу, что может привести к ошибкам при дальнейшем исследовании. Поэтому при транспортировке предназначенную для исследования рыбу помещают в сосуды с водой, взятой из аквариума, где эта рыба содержалась. В этой же воде рыба должна находиться до окончания диагностических исследований.
Непосредственно перед исследованием рыбу отлавливают из аквариума чашкой Петри, высота которой должна соответствовать толщине тела рыбы. Чашку Петри, где находится рыба, накрывают крышкой, лишнюю воду из чашки сливают, дно и крышку насухо вытирают фильтровальной бумагой, а затем полотенцем. Если диаметр и высота чашки значительно превышают длину и толщину тела рыбы, последнюю накрывают небольшим тонким стеклом с тупыми краями. Свободной рукой придерживают крышку чашки или стекло с расчетом лишить рыбу движений, не допуская при этом ее травмирования.
После этого чашку Петри устанавливают на предметный столик стереоскопического микроскопа и при увеличениях 16 X, 32 X и 56 X внимательно просматривают поверхность плавников, кожного покрова и глаз. Нижнюю подсветку используют при микроскопии плавников, а верхнюю - при просмотре кожного покрова и глаз рыбы.
Микроскопические исследования названных выше органов позволяют выявить изменения покровных тканей, наличие крупных и средних эктопаразитов рыб. Подсчет их ведут в абсолютных единицах, а в случае массового поражения - в относительных (десятках, сотнях), беря за основу среднее количество паразитов в одном поле зрения микроскопа.
При увеличениях 16 X и 32 X обнаруживают ихтиофтириусов, триходин, оодиниумов, а при увеличении 56 X -хилодонелл.
Подсчет паразитов непосредственно на рыбе позволяет более точно определить интенсивность инвазии, а это, в свою очередь, полнее отражает степень зараженности рыбы по сравнению с общепринятым методом микроскопии соскобов слизи.
После окончания описанной работы переходят к исследованию слизи с кожного покрова, жабр и содержимого толстого отдела кишечника. Для взятия слизи с кожного покрова используют предварительно увлажненные волосяные кисточки средней жесткости, с жабр - более жесткие. Пользоваться кисточками, изготовленными из синтетических материалов (капрон, силон и др.), недопустимо, так как они неизбежно приводят к травмированию рыбы. Слизь берут несколькими снимающими движениями кисточки с поверхности кожи, плавников и жаберных дуг. После того как на кисточку наберут достаточное количество слизи, ее снимают тупым концом скальпеля или шпателем на предметное стекло, предварительно внеся туда 2 - 3 капли водопроводной воды.
После этого переходят к исследованию содержимого прямой кишки. Рыбу помещают в обильно смоченный водой ватный тампон брюшком вверх. Одним из пальцев свободной руки производят несколько легких движений вдоль брюшка к анальному отверстию, выдавливая каловые массы на предметное стекло. В зависимости от консистенции каловых масс к ним добавляют несколько капель воды, перемешивают и равномерным слоем распределяют на поверхности предметного стекла, после чего покрывают покровным или тонким предметным стеклом.
По мере приготовления препаратов из различных органов рыбы их просматривают на обычном биологическом микроскопе, выявляя, кроме названных возбудителей болезней рыб, и более мелкие: криптобий, костий, октомитусов, паразитических грибков.
Прижизненный метод можно использовать для диагностики таких инфекционных болезней, как плавниковая гниль и язвенная болезнь. Обязательным условием для успешного проведения бактериологических исследований следует считать взятие материала для посевов в период острого течения болезни. При подостром и хроническом течениях болезни возможность выделения возбудителя практически сведена к нулю.
Больную рыбу помещают во влажный ватный тампон, оставляя открытыми наиболее пораженные участки тела и плавников, предварительно промыв их физиологическим раствором. Бактериологической петлей берут содержимое язвочек (при язвенной болезни) и пораженных участков плавников (при подозрении на плавниковую гниль), которое переносят на питательные среды. Этой же петлей готовят мазки-отпечатки и после соответствующей фиксации и окраски их исследуют под микроскопом. Для диагностики плавниковой гнили мазки-отпечатки можно готовить обычным способом, несколько раз прикладывая предметное стекло к наиболее пораженным участкам плавников рыбы.
Бактериологические исследования с использованием указанного метода взятия первичного материала, безусловно, трудоемки и не всегда дают желаемый результат в связи с внесением на питательные среды большого количества банальной микрофлоры, затрудняющей выделение чистой культуры возбудителя болезни. Вместе с тем при необходимости сохранить рыбу живой они вполне приемлемы для работы.
Прижизненная диагностика инвазионных болезней рыб позволяет достаточно оперативно и с большой достоверностью выявлять такие распространенные и опасные болезни экзотических рыб, как ихтиофтириоз, хилодонеллез, триходиноз, оодиниумоз, кос-тиоз, криптобиоз, аргулез, лернеоз, писциколез.
Быстро поставленный диагноз дает возможность в короткий срок организовать и провести необходимые лечебные мероприятия. В случае выявления рыб-паразитоносителей своевременно принятые меры позволяют предупредить вспышку того или иного заболевания рыб.